摘 要:目的高效:建立高效液相色谱法同时快速测定四川豆瓣中5种食品添加剂安赛蜜、苯甲酸、液相乙酸山梨酸、色谱时测赛蜜酸山糖精钠及脱氢乙酸的法同检测方法。方法:样品提取液使用 C18 色谱(250mm×4.6mm5μm)采用二极管阵列检测器进行检测;考察了检测波长、定川豆瓣不同流动相体系,中安不同流动相比例、苯甲梯度洗脱及流动相流速对实验结果的梨酸影响。结果:安赛蜜、糖精脱氢苯甲酸、钠及山梨酸、高效糖精钠及脱氢乙酸在 5.0 ~100.0µg/mL 范围内,液相乙酸浓度与峰面积有良好的色谱时测赛蜜酸山线性关系,相关系数均大于 0.99,法同样品的定川豆瓣加标回收率分别为 81.2% ~ 92.2%、84.1%~ 96.8%、91.1% ~ 99.0%、85.1% ~ 92.3%、89.9% ~ 101.2%,相对标准偏差均小于 3.00%。结论:本方法操作简单、快速、准确,可适用于四川豆瓣中苯甲酸、山梨酸、糖精钠、脱氢乙酸及安赛蜜含量的同时测定。
四川豆瓣是以蚕豆为原料,利用米曲霉等多种微生物共同发酵制成的调味品。四川豆瓣拥有悠久的历史,已经成为川式调味料的重要品种之一。在四川豆瓣生产过程中,为保持产品风味、延长贮存周期,厂家会添加一定量食品添加剂。食品添加剂是以少量添加于食品,以改善食品的外观、风味、组织结构或贮存性质的合成或者天然的非营养物质。防腐剂(主要包括苯甲酸、山梨酸和脱氢乙酸)和人工合成甜味剂(主要包括糖精钠和安赛蜜)是食品行业中被广泛应用的食品添加剂,且经常混合使用。长期过量食用添加剂对人体有一定危害,GB 2760-2014《食品安全国家标准食品添加剂使用标准》对其使用范围和相应限量均有明确规定。国家标准报道的分析方法主要是针对这些添加剂中的一种或几种,同时检测四川豆瓣中上述五种食品添加剂的方法鲜见报道。本论文对四川豆瓣中的安赛蜜、苯甲酸、山梨酸、糖精钠及脱氢的同时检测进行了一系列的研究,考察了检测波长、不同流动相体系、不同流动相比例、梯度洗脱以及流动相流速等检测条件对实验结果的影响,以期为豆瓣酱中五种添加剂的同时检测提供更简便易行的方法。
1 材料与仪器
1.1 材料与试剂
1.1.1 标准物质
苯甲酸标准溶液(1.0mg/mL)、山梨酸标准溶液(1.0mg/mL)、糖精钠标准溶液(1.0mg/mL)、安赛蜜标准溶液(1.0mg/mL)、脱氢乙酸(纯度大于等于 98.0%),购自德国 Dr.Ehrenstotfer。
1.1.2 标准储备液的配制
准确称取脱氢乙酸 10.000mg(准确至0.001mg)用水溶解定容至 10mL,即脱氢乙酸储备液浓度为 1.0mg/mL。
1.1.3 标准工作液的配制
分别准确吸取五种添加剂标准储备液0.10mL、0.25mL、0.50mL、1.25mL、2.50mL、5.00mL 于 50mL 容量瓶中,用水稀释并定容到刻度,即得五种添加剂浓度分别为 2.0µg/mL、5.0µg/mL、10.0µg/mL、25.0µg/mL、50.0µg/mL、100.0µg/mL 的混合标准溶液。
1.1.4 试剂
甲醇(色谱纯,购自美国 Fisher 公司);乙酸铵(色谱纯,CNW);磷酸二氢钾(色谱纯);硫酸铵(色谱纯);试验用水为经 UP 净化系统0.22µm 过滤膜过滤的纯化水)。
1.2 仪器与设备
Agilent 1260 高效液相色谱仪系统(配有DAD 检测器);电子分析天平(TLE204/02):瑞典梅特勒托利多公司;KQ-250E 超声波清洗器:昆山市超声仪器有限公司;色谱柱:Agilent ZORBAX SB-C18;柱:4.6 mm×150mm,5µm;进样量:20µL。
1.3 实验方法
苯甲酸、山梨酸、糖精钠、安赛蜜和脱氢乙酸均易溶于水,因此本次实验选择纯水作为样品的提取溶剂;由于四川豆瓣中含有较多油脂及蛋白质,实验采用将样品溶液加入亚铁氰化钾及乙酸锌沉淀去除蛋白质后,过 0.45µm 滤膜进样的方式。
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