食品添加剂已被广泛使用于食品加工的离色很多领域;近年来,消费者对食品中各种添加剂的谱法安全性日益关注,特别是测定人工合成的添加剂越来越受到人们的重视。目前,碳酸添加饮料生产厂家向饮料中添加的饮料研究甜味剂主要有糖精钠、甜蜜素和安赛蜜,中种添加的离色防腐剂主要有山梨酸和苯甲酸。
这几种添加剂的谱法测定,目前中华人民共和国国家标准食品理化检验方法GB/T5009.28,测定29-2003、碳酸添加GB/T5009.97-2003、饮料研究GB/T5009.140-2003分别规定了食品中山梨酸、中种苯甲酸和糖精钠的离色测定、食品中环己基氨基磺酸钠(又名甜蜜素)的谱法测定以及饮料中乙酰磺胺酸钾(又名安赛蜜)的测定,山梨酸和苯甲酸的测定测定,国标第一法是气相色谱法,样品提取比较麻烦,而且毒性也较大,第二法用的是液相色谱法,而糖精钠和乙酰磺胺酸钾国标法采用的也是高效液相色谱法,由于测定方法不一样,所用的仪器条件也不一样,应分别进行测定,而甜蜜素的测定国家标准采用的是气相色谱法,样品处理比较麻烦,要进行衍生化处理,而且所用试剂毒性也比较大,也费时间;也有文献报道采用反相高效液相色谱法同时测定乙酰磺胺酸钾及糖精钠、苯甲酸、山梨酸含量,但不能同时测定环己基氨基磺酸钠,因此建立一种同时测定碳酸饮料中多种添加剂的方法十分必要。在此我们建立了一种新的测定方法,即采用自动淋洗、电导抑制离子色谱法,同时对碳酸饮料中5种添加剂进行测定,并应用于实际样品的检测,结果令人满意。
1材料与方法
1.1仪器设备与试剂
仪器设备ICS2500离子色谱仪,配置ED50电导检测器,EG50淋洗液发生器,GP50梯度泵,Chromeleon色谱工作站(美国戴安公司);MILLIPORE超纯水机(法国)。试剂苯甲酸、山梨酸、甜蜜素、糖精钠和乙酰磺胺酸钾(安赛蜜)的标准储备溶液由相应的标准品(美国Sigma公司生产)配制,标准储备液浓度为苯甲酸、山梨酸和乙酰磺胺酸钾均为1mg/ml,甜蜜素和糖精钠均为2mg/ml;高纯水(电阻率大于18MΩ*cm)。
1.2方法
1.2.1测定原理
碳酸饮料中苯甲酸、山梨酸、甜蜜素、糖精钠和乙酰磺胺酸钾经AS19色谱柱分离后,以保留时间定性,峰面积定量。
1.2.2色谱条件
色谱柱:IonPacRAS194×250mm,保护柱:IonPacRAG194×50mm;ASRS-ULTRA抑制器,抑制电流50mA,淋洗液为18mM的氢氧化钾溶液,流速1.0ml/min,柱温30℃,进样量25μl,保留时间定性,峰面积定量。
1.2.3标准曲线制备
1.2.3.1混合标准溶液配制
准确吸取苯甲酸和山梨酸标准储备液各25.0ml、糖精钠和甜蜜素标准储备液各12.5ml、乙酰磺胺酸钾标准储备液5.0m置于100ml容量瓶中,加高纯水至刻度,混匀备用,此溶液含苯甲酸、山梨酸、甜蜜素、糖精钠各250μg/ml,乙酰磺胺酸钾为50μg/ml。
1.2.3.2标准曲线制备
吸取甜蜜素、苯甲酸、山梨酸、糖精钠和乙酰磺胺酸钾的混合标准溶液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0ml,分别置于50ml容量瓶中,加高纯水定容至刻度混匀,甜蜜素、苯甲酸、山梨酸、糖精钠的浓度各为5.0、10.0、15.0、20.0、25.0、30.0μg/ml,乙酰磺胺酸钾浓度为1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0μg/ml,以此作为标准系列应用液,按上述色谱条件进行测定,每个浓度重复3次,以浓度为横坐标,峰面积均值为纵坐标,绘制标准工作曲线。
1.2.4样品测定
将试样加热,搅拌除去二氧化碳或超声脱气,然后吸取一定体积除去二氧化碳后的试样,用高纯水稀释10倍(根据试样中被测物含量高低进行稀释),用0.45μm微孔滤膜过滤,滤液供离子色谱测定,进样25μl。
1.2.5结果计算
根据样品峰的峰面积,在标准工作曲线上查含量,再换算出样品中甜蜜素、苯甲酸、山梨酸、糖精钠和乙酰磺胺酸钾的含量。
2结果
2.1标准线性实验结果及标准色谱图
苯甲酸、山梨酸、甜蜜素、糖精钠和乙酰磺胺酸钾(安赛蜜)的标准线性实验结果见表1和表2,线性范围分别为,苯甲酸、山梨酸、甜蜜素、糖精钠均为5.0~30μg/ml,安赛蜜为1.0~6.0μg/ml。标准色谱图见图1。
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