酱油一般以大豆为原料,优化油中添加盐、气相糖等相关辅料,色谱通过制油、法测法发酵等加工工艺所制成的定酱对羟的方食品。其主要特点是基苯甲酸色素含量高,氨基酸含量高,酯类辅料成分种类繁多。含量酱油的优化油中营养丰富、香味独特、气相可口宜人,色谱是法测法家家户户必备的调味品。据相关研究表明,定酱对羟的方2018年,基苯甲酸食用酱油产值约为2.7亿元,酯类总产量约为550万吨。
对羟基苯甲酸酯类通过破坏微生物的细胞膜,使细胞内的蛋白质变性,与抑制微生物细胞的呼吸酶系与电子传递酶系的活性,以达到防腐的作用。在近几年的分析检测中,已经有不少的学者已经对对羟基苯甲酸酯类有了一定的研究,如高元元等,通过气相色谱法同时检测对羟基苯甲酸甲酯与乙酯进行测定,杨杰等,利用Online-GPC-GC-MS测定调味品中对羟基苯甲酸酯类化合物。而本研究直接利用气相色谱分析法进行测定对羟基苯甲酸酯类的4种物质。当目标物在气化室气化后,经过色谱柱的固定相分离,检测器中的信号放大器把收到的信号进行放大,以达到定量的目的。酱油色素含量高、氨基酸含量高,分析的时候杂峰多,从而导致分离难度大,假阳性结果时有发生,从而导致检测结果不准确。因此优化仪器分析条件,提高检测的灵敏度与分离度能有效的解决这些问题。
1、仪器、试剂、标准品与样品仪器:GC-2010Plus岛津气相色谱仪;试剂:氯化钠(分析纯),盐酸(分析纯),乙醚(分析纯),碳酸氢钠(分析纯);标准品:对羟基苯甲酸甲酯(纯度为99.89%)、对羟基苯甲酸乙酯(纯度为99.9%),对羟基苯甲酸丙酯(纯度为98.7%)与对羟基苯甲酸丁酯为标准物质(纯度为99.5%);样品:海天酱油(市场购买)。
准确称取对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯与对羟基苯甲酸丁酯的标准品各约25mg(精确至0.1mg),用无水乙醇定容稀释并至25mL,配制成1000μg/mL的储备液。
吸取标准储备液(1.2.1)0.010mL、0.025mL、0.100mL、1.00mL、2.00mL、3.00mL于一组10mL容量瓶中,用无水乙醇试剂定容,此标准系列的浓度为1.00μg/mL、2.50μg/mL、10.0μg/mL、100μg/mL、200μg/mL、300μg/mL。
称取5g试样于250mL分液漏斗中,依次加入10mL饱和氯化钠溶液,1mL50%盐酸酸化,摇匀,分别以75mL、50mL、50mL无水乙醚提取三次,每次2min,放置片刻,弃去水层,合并乙醚层于250mL分液漏斗中,加入10mL饱和氯化钠溶液洗涤一次,再分别以碳酸氢钠溶液30mL、30mL、30mL洗涤三次,弃去水层。用滤纸吸去漏斗颈部水分,将有机层经过无水硫酸钠(约20g)滤入浓缩瓶中,在旋转蒸发仪上浓缩近干,用氮气除去残留溶剂,准确加入2.0mL无水乙醇溶解残留物,供气相色谱用。
采用色谱条件(1.2.4),10μg/mL的混合对羟基苯甲酸酯类标准溶液的谱图如图1。
(1)色谱柱的确定
对羟基苯甲酸酯类具有酚羟基结构,因此本实验选择InertCap1,InertCap5,InertCap1301,InertCap17与InertCapWAX在柱温箱为100℃,标液浓度均为50μg/mL的条件下进行测试,结果谱图如2~6。
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